Resumen de la experiencia en la preparación de medios de cultivo

La preparación de medios de cultivo es una de las habilidades básicas del personal de los laboratorios de microbiología. Los procedimientos de preparación adecuados, los métodos correctos de esterilización, las condiciones de almacenamiento adecuadas y las pruebas de control de calidad garantizan medios de cultivo de alta calidad.
I. Análisis de las causas de los problemas comunes de calidad
1. Fallo en la solidificación del medio
Calentamiento excesivo durante la preparación
Hidrólisis ácida del medio provocada por un valor bajo de pH
Pesaje incorrecto; disolución incompleta del agar
Mezcla insuficiente de los componentes del medio
2. Valor de pH incorrecto
Calentamiento excesivo durante la preparación
Agua de mala calidad
Contaminación por sustancias químicas exógenas
Temperatura inadecuada durante la medición del pH
Medidor de pH sin calibrar
Mala calidad del medio de cultivo deshidratado
3. Color anormal
Calentamiento excesivo durante la preparación
Agua de mala calidad
Valor de pH incorrecto
Contaminación externa
Mala calidad del medio de cultivo deshidratado
4. Formación de precipitados
Calentamiento excesivo durante la preparación
Agua de mala calidad
Valor de pH incorrecto
Impurezas en las materias primas
Mala calidad del medio de cultivo deshidratado
5. Inhibición del crecimiento / baja tasa de crecimiento
Calentamiento excesivo durante la preparación
Agua de mala calidad
Mala calidad del medio de cultivo deshidratado
Componentes incorrectos o dosificación incorrecta de los suplementos
Residuos tóxicos en envases o en el agua
6. Selectividad deficiente
Calentamiento excesivo durante la preparación
Mala calidad del medio de cultivo deshidratado
Se aplicó una fórmula incorrecta
Componentes añadidos de manera incorrecta, por ejemplo, suplementos añadidos a un medio sobrecalentado, concentración incorrecta de los suplementos, etc.
7. Contaminación
Deficiencias en las prácticas de asepsia
Suplementos contaminados
Esterilización inadecuada
II. Precauciones
1. Los medios de cultivo subenvasados deberán esterilizarse el mismo día (lo ideal es realizar la esterilización en un plazo de 2 horas). El volumen de llenado no deberá exceder los dos tercios del volumen del envase para evitar que se desborde durante la esterilización.
2. En los laboratorios se utiliza la esterilización por calor húmedo para los medios de cultivo. Esterilice a la temperatura y durante el tiempo adecuados, de acuerdo con las instrucciones del medio de cultivo. En particular, en el caso de los medios con alto contenido de azúcar, se debe evitar el uso de temperaturas excesivas, ya que estas provocan la caramelización del azúcar y comprometen la calidad del medio.
3. Se deberán llevar registros de preparación para cada lote de medio. Se deberá hacer una copia duplicada: el registro original se archivará para referencia futura, y la copia duplicada se guardará junto con el medio terminado para evitar confusiones.
4. Los medios de cultivo deben almacenarse en un lugar fresco y oscuro, preferiblemente en un refrigerador convencional. El período de almacenamiento no debe exceder una semana; los medios vertidos en placas deben utilizarse en un plazo de 3 días. Cada lote de medio debe ir acompañado de un registro de preparación por duplicado o de una etiqueta claramente identificable.